O termo lipídio é usado para classificar quimicamente um grupo diverso de elementos compostos por carbono, hidrogênio e oxigênio, cuja única característica física em comum é a insolubilidade em água (Lehninger et al. 2005), sendo óleos e gorduras seus principais representantes. São moléculas orgânicas formadas a partir da associação entre ácidos graxos e álcool, consideradas a principal reserva de energia dos seres vivos. Embora insolúveis em água, são solúveis em solventes orgânicos, como éter etílico, éter de petróleo, hexano, benzeno, clorofórmio ou metanol. São classificados em:

•      Simples: óleos e gorduras, representados pelos ésteres de ácidos graxos e glicerol e as ceras, ésteres de ácidos graxos e monohidroxiálcoois de alto peso molecular
•     Compostos:  fosfolipídios, que consistem de ésteres de ácidos graxos que contêm ácido fosfórico e um composto nitrogenado e os glicolipídios (compostos formados por ácidos graxos, um grupo nitrogenado e um carboidrato)
•   Derivados: ácidos graxos, álcoois, esteróis, hidrocarbonetos, vitaminas lipossolúveis, pigmentos e compostos nitrogenados

DETERMINAÇÃO DE GORDURA – EXTRAÇÃO COM SOLVENTES

    A determinação desses compostos é realizada em diversos segmentos e indústrias como de alimentos, bebidas, nutrição animal, química e na área ambiental (águas residuais, efluentes e lodos) entre outras áreas. Além disso, a extração de gordura também pode ser uma etapa necessária no preparo de amostras para algumas análises.

     Goldfish e Soxhlet são métodos gravimétricos utilizados de determinação, baseados na perda de peso do material seco submetido a extração por meio de solventes orgânicos. Estes métodos consistem basicamente de três etapas:

1) Extração de gorduras da amostra com solventes

2) Eliminação do resíduo do solvente por evaporação após a extração: necessário a utilização de Estufa de circulação e renovação de ar, modelosTE-394/1, TE-394/2 ou TE-394/3, para secagem da amostra e reboilers após o termino da extração, sendo levados posteriormente ao dessecador a vácuo, modelo TE-3950 ou TE-3950/1, para eliminação da umidade excessiva.

A estufa também é necessária para secagem de vidrarias e reboilers antes da realização da extração para a remoção da umidade.

3) Quantificação da gordura após a secagem: por ser uma análise gravimétricas, são utilizadas balanças analíticas ou de precisão para pesagem inicial e após as extrações.  

A escolha do solvente utilizado vai depender dos componentes lipídicos existentes na amostra.  A preparação da amostra para determinação de gordura deve ser cuidadosa de maneira a evitar a sua degradação, ressaltando que amostras líquidas ou semilíquidas devem ser submetidas ao preparo de amostra com o intuito de transformá-las em estado sólido. Em amostras onde a maior parte dos lipídeos está ligada a proteínas e carboidratos, e a extração direta com solventes não polares é ineficiente, é necessário a hidrólise ácida ou outros métodos no preparo da amostra.

O controle da temperatura e tempo de exposição do material no solvente também é controlado de modo que não ocasione a degradação da amostra. De maneira geral, a eficiência da extração a quente depende de uma série de fatores:

•       Natureza do material a ser extraído;
•       Tamanho das partículas, quanto menor, maior a superfície de contato e contribuindo para a penetração do solvente;
•       Umidade da amostra: a água presente na amostra dificulta a penetração do solvente orgânico;
•       Natureza do solvente;
•       Semelhança entre as polaridades do solvente e da amostra;
•       Ligação dos lipídeos com outros componentes da amostra;
•       Circulação do solvente através da amostra;
•       Quantidade relativa entre solvente e material a ser extraído.

GOLDFISH X SOXHLET

O Goldfish é um método utilizado em um sistema de refluxo contínuo com solvente a quente, enquanto que o Soxhlet é um método de extração intermitente, fazendo com que a amostra não permaneça continuamente em contato direto com o solvente. Embora os dois métodos sejam classificados como “Extração com solvente a quente” para o Soxleht essa condição tem uma peculiaridade, pois o solvente entra em contato com a amostra após a ebulição e em baixa temperatura.

 O método Soxhlet, por ser intermitente, exige uma maior quantidade de solvente (porque o volume total tem que ser suficiente para garantir o efeito sifão) e tempo de análise (cerca de três a seis horas). Enquanto o Goldfish é um método mais rápido, que permite a extração em até uma hora e meia.

Apesar das diferenças existentes, ambos os métodos são compatíveis e seguem procedimentos de validação previstos pela A.O.A.C. - Association of Official Analytical Chemists (2016), para análises de alimentos, bebidas e concentrados, e APHA - Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater (2012) para amostras de águas e efluentes.

Tabela 1. Comparação entre os métodos de extração 

  SISTEMA PARA DETERMINAÇÃO DE GORDURA: TE-045/5 ou TE-045/8

Baseado no método Goldfish, o equipamento é utilizado para amostras secas, que são colocadas em papel filtro ou cartucho no interior de um cesto, o qual é inserido em um reboiler que contenha o solvente adequado para extração da gordura da amostra.

BATERIA DE EXTRAÇÃO TIPO SEBELIN / SOXHLET: TE-1881/6

Baseado no método Soxhlet, amostra deve ser previamente dessecada, sendo posteriormente transferida para um papel filtro ou cartucho (geralmente de celulose) em aparelho extrator de Soxhlet.

                Para ambos equipamentos é recomendado o uso de banho termostatizado, modelo TE-2005, que garante o fornecimento de água com temperatura ideal para refrigeração dos condensadores, otimizando o processo de extração. Além disso, a utilização do banho contribui para economia no consumo de água. Caso sejam utilizados mais de um equipamento para extração de gordura, é necessária a utilização de banhos com maior capacidade de refrigeração como os modelos TE-183, TE-184 e TE-184/1.

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REFERÊNCIAS

AOAC - Association of Official Analytical Chemists. Official Methods of Analysis. 20th Edition. Rockville: AOAC International, 2016. 3172p.

Lehninger, Albert L, David L. Nelson, and Michael M. Cox. Lehninger Principles of Biochemistry. New York: W.H. Freeman, 2005.

Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. E.W. Rice, R.B. Baird, A.D. Eaton, L.S. Clesceri, editors. 22ª ed. Washington: American Public Health Association, 2012. 1496p.